1.無菌室應設有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應達到10000級，室內溫度保持在18-24℃，濕度保持在45-65%。超凈臺潔凈度應達到100級
2.無菌室應保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。
3.嚴防一切滅菌器材和培養基污染，已污染者應停止使用。
4.無菌室應備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，75%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液，等等。
5.無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。
6.需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應包扎嚴密，并應經過適宜的方法滅菌。
7.工作人員進入無菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換專用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作。
8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時打開超凈臺進行吹風。操作完畢，應及時清理無菌室，再用紫外燈輻照滅菌30分鐘。